Эймериоз птиц — широко распространенная протозойная болезнь, характеризующаяся поражением тонкого и толстого кишечника. Болезнь вызывается одноклеточными паразитами отряда Coccidiida. У кур паразитируют 11 видов эймерий, при этом наибольшую опасность представляют Eimeria tenella, E. necatrix, E. brunette, E. maxima. Полностью исключить заражение птицы эймериями невозможно, так как во внешней среде они существуют в виде ооцист, крайне устойчивых к внешним негативным воздействиям и переносимых самой птицей, другими животными и человеком. Обычные средства дезинфекции на эймерий просто не действуют.
Чаще всего эймериозом болеют цыплята до 4,5 месяцев, самый опасный период от 2 до 6 недель. У взрослой птицы развивается относительная невосприимчивость и даже будучи зараженной, птица не болеет. Более всего с эймериозом сталкиваются в хозяйствах с напольным содержанием бройлеров, где не соблюдается чистота помещения для содержания молодняка, нарушаются санитарные нормы ухода. При клеточном содержании эймериоз возникает значительно реже. Заболеть птицы могут круглый год, но наиболее опасны в этом плане весна и лето.
Проявившиеся симптомы во многом зависят от количества полученных ооцист и, как следствие, степени поражения, а также скорости размножения эймерий. Малое количество паразитов могут вызвать у птицы лишь заражение с последующим развитием иммунитета без явных симптомов. Тяжелая форма может повлечь за собой летальный исход вследствие развития тяжелого (геморрагического, дифтеритического) воспаления в различных участках кишечника. Особенно высок процент смертности при поражении E. tenella, и E. necatrix — до 70-80%. Нарушение слизистых оболочек кишечника на фоне снижения иммунной реактивности организма птиц способствует наслоению других болезней, чаще инфекционной этиологии.
Эймериоз представляет собой глобальную проблему для птицеводства, которая приводит к огромным убыткам на птицефабриках, особенно при высокой плотности посадки птицы. Экономический ущерб от эймериоза связан с повышением конверсии корма, замедлением темпов роста, увеличением падежа и ветеринарными затратами на профилактику и лечение этой болезни. В мировом масштабе ежегодные затраты на лечение и профилактику эймериоза в коммерческом птицеводстве оцениваются в 2 миллиарда евро.
Традиционный метод контроля эймериоза основан на химиопрофилактике, то есть на использовании специфических препаратов — кокцидиостатиков. Этот метод уже давно доказал свою эффективность. Однако опасность развития резистентности к противококцидийным препаратам и возможный запрет на их применение поднимают вопрос о профилактике кокцидиоза с помощью альтернативных растительных кокцидиостатиков.
Многие специалисты часто недооценивают важность целостности кишечника, полагая, что он является только средством для усвоения необходимых организму питательных веществ, совершенно забывая о роли лимфоидных образований пищеварительного канала в развитии иммунных реакций.
GALT (gut-associated lymphoid tissue) — лимфоидная ткань, связанная со слизистой оболочкой пищеварительного канала, фактически является крупнейшим вторичным иммунным органом. Она включает глоточную, пищеводную и слепокишечные миндалины, дивертикул Меккеля, пейровы бляшки, солитарные фолликулы.
Целью работы была морфологическая оценка эффективности альтернативного растительного противоэймериозного препарата Norponin®ХО2, производства «НОР-ФИД» (Бокузе, Франция) в сравнении с традиционной схемой профилактики эймериоза.
Материалом для исследований служили кусочки органов (12-перстная, тощая, подвздошная и слепая кишки), зафиксированные в 10% растворе формалина. Образцы органов получены в ходе научно-производственного опыта по изучению эффективности альтернативного растительного противоэймериозного препарата Norponin®ХО2 в сравнении с традиционной программой профилактики эймериоза, основанной на использованием монензина с двукратным применением толтразурила.
Основными компонентами Norponin®ХО2 являются субстанции растительного происхождения: экстракт Юкки Шидигера (Yucca Schidigera) и экстракт семени пажитника (Trigonella foenum-graecum), активным элементом которых являются стероидные сапонины. Массовая доля основных компонентов составляет 75%. В составе Norponin®ХО2 имеются также вспомогательные компоненты: консерванты (сорбиновая кислота (E200) — 2,3%, пропионовая кислота (E280) — 0,3%); связующие вещества (сепиолит (E562) — 9% и диоксид кремния (E551) — 13,4%). Содержание сапонинов не менее 8%.
По внешнему виду Norponin®XO2 представляет собой сыпучий порошок бежево-желтого цвета. Его выпускают расфасованным по 25 кг в трехслойных крафт-мешках. Хранят в оригинальной, закрытой упаковке производителя в сухом, хорошо проветриваемом помещении, не подвергающихся воздействию прямых солнечных лучей при температуре от минус 5°С до плюс 30°С и относительной влажности не более 75%. Выдерживает температуру 149°С во время экструзии или другого метода переработки при высокой температуре. Срок годности препарата составляет 24 месяца с даты изготовления при соблюдении условий хранения и транспортирования.
Механизм противоэймериозного действия Norponin®XO2 обусловлен способностью специально подобранного состава сапонинов разрушать клетки возбудителя на всех стадиях развития за счет взаимодействия с мембранными стеролами (представленным в основном холестерином) клетки. Образующиеся комплексы являются нерастворимыми, что приводит к образованию мембранных пор в клеточной стенке возбудителя. В результате происходит ингибирование цикла развития паразита и лизис клеток возбудителей эймериоза. Сапонины входящие в состав Norponin®XO2 активны в отношении всех видов эймерий, паразитирующих в том числе у с/х птицы: Eimeria tenella, E. necatrix, E. mivati, E. maxima, E. brunetti, E. acervulina, E. mitis, E. praecox.
Norponin®XO2 благодаря своему натуральному составу не обладает кумулятивным действием и не приводит к образованию токсичных остатков в продуктах животноводства. Norponin®XO2, используется как в полной программе профилактики кокцидиоза, так и челночных программах, в отличие от большинства кокцидиостатиков, может использоваться без периода ожидания и применяться в классических программах с кокцидиостатиками для продолжения эффективного контроля кокцидиоза.
Научно-производственный опыт был проведен в условиях птицефабрики «Tela» Ltd (Грузия). Под наблюдением находилось 20 птичников общим поголовьем 200000 бройлеров кросса ROSS-308. 19 птичников получали с кормом монензин натрия 10%, в дозе 500г/тонну корма с D1 по D35, так же толтразурил 2,5% в дозе 1 л/тонну воды, в 18-20-дневном и 26-28-дневном возрасте. Цыплята опытного птичника (20000 бройлеров) в 1-40-дневном возрасте получали растительный кокцидиостатик Norponin®XO2 ежедневно, в дозе 0,25 кг/тонну корма. Все птичники выращивались в течение 40 дней. В 32-дневном возрасте по 5 цыплят из опытной группы убивали для изучения морфологических изменений в пищеварительном канале. Эвтаназию птицы осуществляли согласно требований, изложенных в Европейской конвенции по защите домашних животных, а также в методических указаниях по гуманной эвтаназии домашних животных. Для дальнейших исследований отбирали кусочки 12-перстной, тощей, подвздошной и слепых кишок. Органы отмывали от крови охлажденным физиологическим раствором, а затем фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. Зафиксированный материал подвергали уплотнению путем заливки в парафин по общепринятой методике. Обезвоживание и парафинирование кусочков органов проводили с помощью автомата для гистологической обработки тканей «MICROM STP 120» (Германия) типа «Карусель». Для заливки кусочков и подготовки парафиновых блоков использовали автоматическую станцию «MICROM EC 350». Гистологические срезы кусочков органов, залитых в парафин, готовили на санном микротоме. Гистосрезы окрашивали гематоксилин–эозином и по Браше. Депарафинирование и окрашивание гистосрезов проводили с использованием автоматической станции «MICROM HMS 70». Гистологическое исследование проводили с помощью светового микроскопа «Биомед-6» (Россия). Полученные данные документированы микрофотографированием с использованием цифровой системы считывания и ввода видеоизображения «ДСМ-510», а также программного обеспечения по вводу и предобработке изображения «ScopePhoto». После отбора материала для проведения исследований трупы птиц были утилизированы в вскрывочном помещении ветеринарного блока птицефабрики.
Гистологическое исследование 12-перстной, тощей, подвздошной и слепых кишок 32-дневных цыплят-бройлеров показало, что развитие ворсинок и крипт (общекишечных желез) в слизистой оболочке соответствовало виду и возрасту птиц. Количественное соотношение отдельных групп эпителиальных клеток (ворсинчатые, безворсинчатые эпителиоциты, бокаловидные и камбиальные клетки, железистый эпителий) в различных отделах кишечника было в пределах морфологической нормы.
В 12-перстной кишке цыплят-бройлеров контрольной группы регистрировались признаки острого катарального воспаления: воспалительная гиперемия и слабо выраженный отек собственной пластинки, гиперсекреция бокаловидных клеток, некроз и десквамация покровного эпителия. В цитоплазме покровного эпителия отдельных ворсинок выявлялись генерации эймерий. Кроме того, отмечена интенсивная эозинофильная инфильтрация слизистой оболочки (рис. 1, 2) — косвенный признак эймериозной инвазии. Известно, что эозинофильные лейкоциты играют важную роль в формировании противопаразитарного иммунитета. В связи с развитием воспалительного отека и закупорки выводных протоков отмечено резкое расширение общекишечных желез. В их просвете присутствовали некротизированные эпителиоциты, а также эозинофилы. В то же время кишечные ворсинки выглядели атрофированными.
Рис. 1 – Микрофото. 12-перстная кишка 32-дневного цыпленка-бройлера контрольной группы. Генерации эймерий (стрелки слева), эозинофильная инфильтрация (стрелки справа). Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Рис. 2 – Микрофото. Генерации эймерий в цитоплазме эпителиоцитов 12-перстной кишки 32-дневного цыпленка-бройлера контрольной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
В содержимом кишечника присутствовали единичные колонии микроорганизмов, имеющие морфологические признаки рода Clostridium.
В 12-перстной кишке цыплят-бройлеров опытной группы отмечены: слабо выраженная воспалительная гиперемия сосудов микроциркуляторного русла, некроз и десквамация покровного эпителия верхушечной части ворсинок, интенсивная лимфоидная инфильтрация собственного и подслизистого слоев слизистой оболочки (рис. 3, 4).
Рис. 3 – Микрофото. Интенсивная лимфоидная инфильтрация слизистой оболочки 12-перстной кишки 32-дневного цыпленка-бройлера опытной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Рис. 4 – Микрофото. Высокий уровень развития диффузной лимфоидной ткани в 12-перстной кишке 32-дневного цыпленка-бройлера опытной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 120
Микроморфометрическое исследование основных структурных компонентов 12-перстной кишки показало (табл. 1), что у цыплят-бройлеров опытной группы длина ворсинок увеличивалась по сравнению с контрольными значениями в 1,5 раза (P<0,05), а ширина — в 1,6 раза (P<0,05). Кроме того, у подопытных птиц отмечалось достоверное увеличение, по сравнению с контролем, размеров лимфоидных узелков на 38-65%, а также площади диффузной лимфоидной ткани — на 42% (табл. 2).
В тощей кишке 32-дневных цыплят-бройлеров контрольной группы регистрировалась воспалительная гиперемия капилляров, артериол и венул, залегающих в основе кишечных ворсинок, расширение лимфатических капилляров, интенсивная лимфоидно-макрофагальная инфильтрация без формирования узелковой лимфоидной ткани. Имелись единичные микронекрозы соединительнотканной основы ворсинок. На поверхности покровного эпителия выявлялись клостридии в виде цепочек или мелких колоний. Отмечены также некроз и десквамация небольших групп эпителиоцитов, гиперсекреция бокаловидных клеток. Сходные, но менее выраженные структурные изменения регистрировались у птиц подопытной группы.
При микроморфометрическом исследовании тощей кишки у цыплят-бройлеров опытной группы установлена тенденция к увеличению, по сравнению с контрольными данными, длины и ширины кишечных ворсинок, глубины и ширины общекишечных желез, однако изменения были недостоверными.
Большую часть слизистой оболочки подвздошной кишки занимали железы, окруженные тонкими прослойками мышечной пластинки слизистой оболочки. Собственная пластинка и эпителиальный слой образовали многочисленные складки, где выявлялись слизистые железы и лимфоидная ткань в виде диффузных скоплений и узелков. При этом микроморфометрические показатели лимфоидного аппарата подвздошной кишки цыплят-бройлеров опытной и контрольной групп различались недостоверно (табл. 2).
У цыплят-бройлеров контрольной группы кишечные ворсинки находились в состоянии атрофии. Толщина ворсинок при этом составляла 312,65±26,94 мкм (у цыплят опытной группы — 493,47±34,85 мкм; P<0,05), а длина — 783,03±65,28 мкм (у цыплят опытной группы — 854,83±75,78 мкм; P<0,05). Другие микроморфометрические показатели изменялись недостоверно (табл. 1). В цитоплазме покровного эпителия отдельных ворсинок выявлялись генерации эймерий (рис. 5). Отмечена интенсивная эозинофильная инфильтрация собственного слоя слизистой оболочки. Регистрировались также признаки острого катарального воспаления. В содержимом подвздошной кишки присутствовали некротизированные эпителиоциты, колонии клостридий и многочисленные ооцисты эймерий (рис. 6).
В подвздошной кишке цыплят опытной группы отмечалась слабо выраженная воспалительная гиперемия сосудов микроциркуляторного, интенсивная лимфоидная инфильтрация слизистой оболочки (рис. 7, 8).
Рис. 5 – Микрофото. Генерации эймерий в цитоплазме эпителиоцитов подвздошной кишки 32-дневного цыпленка-бройлера контрольной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Рис. 6 – Микрофото. Колонии клостридий и ооцисты эймерий (стрелки) в содержимом подвздошной кишки 32-дневного цыпленка-бройлера контрольной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Рис. 7 – Микрофото. Развитая узелковая лимфоидная ткань подвздошной кишки 32-дневного цыпленка-бройлера опытной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Рис. 8 – Микрофото. Воспалительная гиперемия и лимфоидная инфильтрация ворсинок подвздошной кишки 32-дневного цыпленка-бройлера опытной группы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Гистологическое исследование слепой кишки вблизи места бифуркации показало, что слизистая оболочка была обильно инфильтрирована диффузными скоплениями лимфоцитов. Площадь диффузной лимфоидной ткани в слепокишечных миндалинах у цыплят-бройлеров опытной группы составила 8771,35±429,12 мкм2, а у птиц контрольной группы — 6346,47±498,84 мкм2 (табл. 2; P<0,05). Среди диффузных скоплений лимфоидной ткани выявлялись многочисленные лимфоидные узелки, размеры которых у цыплят-бройлеров опытной группы достоверно увеличивались по сравнению с контролем в 1,6-1,8 раза. В скоплениях диффузной лимфоидной ткани миндалин цыплят-бройлеров контрольной группы обнаруживались скопления эозинофилов.
В покровном эпителии отдельных ворсинок слепой кишки птиц контрольной группы обнаруживались генерации эймерий в виде характерных цитоплазматических включений (рис. 9). Это приводило к некрозу и десквамации эпителиоцитов. В содержимом слепых кишок обнаруживались не только некротизированные эпителиоциты и ооциты эймерий, но и обширные колонии клостридий. В отдельных участках развивалась клостридиальная эмфизема слизистой оболочки. На фоне воспалительной гиперемии выявлялись множественные кровоизлияния, которые локализовались не только в собственной пластинке, но и в просвете кишечных желез. Существенных структурных нарушений в слепой кишке цыплят-бройлеров опытной группы выявлено не было (рис. 10).
Микроморфометрическое исследование слепой кишки показало (табл. 1), что у цыплят-бройлеров опытной группы длина и ширина ворсинок увеличивалась по сравнению с контрольными значениями на 29% (P<0,05).
Рис. 9 – Микрофото. Слепая кишка 32-дневного цыпленка-бройлера контрольной группы. Генерации эймерий (стрелки справа), колонии клостридий (стрелки слева). Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 480
Рис. 10 – Микрофото. Слепая кишка 32-дневного цыпленка-бройлера опытной группы в состоянии морфологической нормы. Гематоксилин–эозин. Биомед-6. Ув.: х 120
Таблица 1. Микроморфометрические показатели цыплят-бройлеров опытной и контрольной групп в 32-дневном возрасте (М+m, Р).
Примечание: Р1–2 — 1–2 группы.
Таблица 2. Микроморфометрические показатели лимфоидного аппарата кишечника цыплят-бройлеров опытной и контрольной групп в 32-дневном возрасте (М+m, Р).
Примечание: Р1–2 — 1–2 группы.
Анализ полученных результатов исследований позволяет сделать заключение о том, что:
- Применение цыплятам-бройлерам опытной группы растительного кокцидиостатика «Norponin®XO2» ежедневно, в дозе 0,25 кг/тонну корма профилактирует появление эймериозной инвазии во всех отделах пищеварительного канала, способствует достоверному увеличению длины и ширины кишечных ворсинок в 12-перстной, подвздошной и слепых кишках, возрастанию размеров лимфоидных узелков и площади диффузной лимфоидной ткани в 12-перстной кишке и слепокишечных миндалинах, по сравнению с показателями в контрольной группе.
- Базовая профилактическая схема, основанная на применении препаратов «Салиномицин натрия 12%» (ежедневно, в дозе 0,5 кг/тонну корма) и «Толтразурил 5%» (в дозе 1 литр на тонну воды, дважды за откорм — на 16-17 и 21-22 дни жизни) оказалась малоэффективной для цыплят-бройлеров контрольной группы. При исследовании пищеварительного канала особей данной группы в 32-дневном возрасте выявлены гистологические изменения, характерные для эймериоза с наслоением некротического (клостридиального) энтерита (с преимущественной локализацией в 12-перстной, подвздошной и слепых кишках). Развитие ведущих патологических процессов сопровождалось атрофией кишечных ворсинок в 12-перстной, подвздошной и слепых кишках, атрофией и делимфатизацией лимфоидного аппарата 12-перстной кишки и слепокишечных миндалин, что было подтверждено результатами микроморфометрического исследования.
Эффективность «Norponin®XO2» подтверждает не только описанные выше исследования, но и производственные показатели, полученные в результате эксперимента:
Таким образом, полученные результаты исследований свидетельствуют о высокой профилактической эффективности растительного кокцидиостатика «Norponin®XO2», производства «NOR-FEED» SAS, 3 rue Amédéo Avogadro, 49070 Beaucouze, France / «НОР-ФИД» САС, 3 руи Амедео Авогадро, 49070 Бокузе, Франция.
ООО «ПТК «АйБиЭс» info@ibsagro.ru www.ibsagro.ru +7 495 565-41-94. Московская область, г. Люберцы, ул. Комсомольская, 15а.
Павел Мельников, генеральный директор унитарного предприятия «МВСервис», ветеринарный врач.
Игорь Громов, заведующий кафедрой патологической анатомии и гистологии УО «Витебская ордена „Знак Почета“ государственная академия ветеринарной медицины», доктор ветеринарных наук, профессор.
Денис Журов, доцент кафедры патологической анатомии и гистологии УО «Витебская ордена „Знак Почета“ государственная академия ветеринарной медицины», кандидат ветеринарных наук.
Библиография: H.S. Lillehoj, S.I. Jang, Lee & E.P. Lillehoj, «Avian coccidiosis as a prototype intestinal disease - host protective immunity and novel disease control strtegies». Бирюков, И.М. Структурные особенности иммунного ответа организма кур при кокцидиозе / И.М. Бирюков, Т.М. Бирюкова // Птицеводство. – 2022. – No11. – С. 73-81.
